1. 細胞培養法
(1)非血吸附病毒檢查
將新生牛血清供試品分別接種到人源(如人二倍體細胞)、猴源(如Vero細胞)以及牛腎傳代細胞三種細胞,采用的牛腎傳代細胞系應證明無牛病毒的污染。每種細胞至少接種6瓶,每瓶細胞懸液接種量不少于培養液總量的25%。于36±1℃培養21天。接種的每種細胞都應同時設立牛血清陰性對照和病毒陽性對照,陰性對照用牛血清應證明無牛病毒污染。
培養過程中可根據細胞生長情況更換細胞培養液,每次更換培養液前應觀察(肉眼/顯微鏡)有無細胞病變出現。培養到期后,陰性對照應無任何細胞病變出現,陽性對照應出現典型的細胞病變,試驗成立。供試品檢查應不出現任何細胞病變為陰性,符合要求。
(2)血吸附病毒檢查
將上述接種供試品的每種細胞取2瓶進行血吸附病毒檢查。用0.2%~0.5%雞和豚鼠紅細胞混合懸液覆蓋于細胞表面,置2~8℃分鐘,然后置20~25℃30分鐘,分別進行鏡檢,觀察紅細胞吸附情況, 供試品檢查結果均應為陰性。試驗同時應設立血吸附陽性對照。
2. 免疫熒光抗體檢查法
采用直接或間接免疫熒光抗體檢查法,至少應對牛腹瀉病毒,牛腺病毒、牛細小病毒、呼腸孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒進行檢查,結果均應為陰性。