LCM技能別離細胞速度較以往辦法有很大進步,例如,從腎安排切片中別離一個腎小球(Glomerulus)所需時刻小于10秒,一小時內即可輕松地別離上百個腎小球。
神經體系首要由兩類細胞構成:神經元和膠質細胞。
在腦內,不一樣解剖區域行使不一樣功用,這兒所講的解剖區域是指核團。
美國國立健康研討院腫瘤研討所病理研討室與生物醫學設備組協作研發激光捕獲顯微切開技能,發展為Acturus 的PixCell II體系。
在操作這套體系時,首要在安排切片上掩蓋一層通明的膜,在顯微鏡下查詢該安排切片,挑選某一分外細胞后,打開脈沖式紅外激光束,使膜融化變得粘性很強(該膜的成份為 Ethylene Vinyl Acetate Polymer),等到冷卻后將該方位的細胞牢固地粘附在上面然后別離細胞。
該種辦法較以往辦法改善的當地:首要,它簡略,不需求移動任何切片部位,一步即可完畢從安排中別離分外細胞,這些在膜上的細胞依然堅持其原有的形狀,運用無菌、一次性的膜可zui大極限地防止或許的污染。
因此,假定研討者首要是為了研討很多種基因在特定核團的神經元或膠質細胞的表達狀況,新的解決方案之一便是組合LCM技能、RNA擴增技能和基因芯片技能。
即運用LCM技能將特定核團的神經元或膠質細胞取出,獲取總RNA或mRNA,RNA反轉錄為cDNA并進行擴增.zui終將cDNA標記為探針,和基因芯片雜交。
假定研討的基因品種數不多,那么也能夠只獲取LCM取得的細胞的總RNA,運用定量RT-PCR技能來進行基因表達剖析。
這關于后續進行PCR查看是尤為重要的。其次,使膜活化所需的激光能量很?。?lt;50mW),與慣例顯微協作是滿足的,完夠滿足臨床病理安排細胞顯微別離的需求。
核團在顯微鏡下才能夠區別,是相對會合在一個區域的或許行使必定功用的神經元和膠質細胞的集合體。
把某個核團從腦內取出來是不太實踐的。腦內核團數以百計,假定要想研討基因在腦內核團的表達水平,在早年只能用原位雜交技能。
假定要想研討蛋白質的表達水平或磷酸化等狀況,只能用免疫安排化學技能。
而這兩個技能雖然能準確定位基因或蛋白質在腦內核團的表達狀況,缺點是通量小。