ELISA試劑盒蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯絡的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。
蛋白質抗原大多也可選用與抗體類似的方法包被。
當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分顯露,在這種情況下,直接包被作用不佳,能夠選用直接的捕獲包被法,即先將對于該抗原的特異抗體作預包被,這今后通過抗原抗體反響使抗原固相化。
這種物理吸附對錯特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。
載體對不一樣蛋白質的吸附才干是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質一般富含更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。
IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯合多發生在Fc段上,抗體聯絡點顯露于外,因此抗體的包被一般均選用直接吸附法。
此直接聯絡在固相上的抗原遠離載體表面,其抗原決定簇也得以充分顯露。
ELISA試劑盒直接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大進步,因此含雜質較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。
將抗原或抗體固定在進程稱為包被(coating)。
包被便是抗原或抗體聯絡到固相載體表面的進程。
直接包被的另一利益是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。
抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般選用這種包被方法。
不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可選用格外的包被方法。
在查看抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而遍及的固相載體一般不能直接與核酸聯絡。
可將聚苯乙烯板先經紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附功用。
固相載體先用堿性蛋白質,如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包被,也可進步核酸的聯絡力。
也可用親和素生物素系統作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參與生物素化的DNA,這種包被方法均勻、結實,已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。
ELISA試劑盒脂類物質無法與固相載體聯絡,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后參與ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風吹干,待酒精揮發后,讓脂質天然干固在固相表面。